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圖2.擴(kuò)增曲線顯示了設(shè)置不當(dāng)?shù)幕€ (A) 和設(shè)置正確的基線 (B)。
閾值的設(shè)置
Applied Biosystems?提供兩種閾值設(shè)置方法：自動(dòng)和手動(dòng)。自動(dòng)設(shè)置中，軟件將自動(dòng)選擇閾值，此閾值更適合平臺(tái)更高的曲線 (圖3中的藍(lán)色曲線)。然而這將導(dǎo)致此數(shù)據(jù)組中的紅色曲線的 Ct 值出現(xiàn)偏差，因?yàn)槠渲良验撝当却酥蹈?。通常情況下，默認(rèn)設(shè)置通常已十分適當(dāng)，但也可將閾值手動(dòng)拖至指數(shù)期中間，以獲得更高的準(zhǔn)確度。因此，需對(duì)每個(gè)數(shù)據(jù)組進(jìn)行獨(dú)立研究，這樣才能根據(jù)具體情形選擇至佳閾值。
圖3.對(duì)數(shù)曲線屏幕截圖顯示了兩組曲線，它們的平臺(tái)高度和指數(shù)期不同。擴(kuò)增曲線中確定 Ct 的至準(zhǔn)確部分位于對(duì)數(shù)曲線指數(shù)期的中間。至佳閾值設(shè)置有時(shí)因各組數(shù)據(jù)的不同而異。
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