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    哪些樣品能用超微量測(cè)?一文助你判斷樣品是否兼容

    Nanophotometer?可以測(cè)量的樣品種類,是用戶關(guān)心的問題。特別是經(jīng)常測(cè)量的核酸類樣品,我們一般用dsDNA的濃度作為示例,以展示設(shè)備的濃度測(cè)量范圍,而您可能會(huì)問,RNA可以測(cè)量嗎?引物可以測(cè)量嗎?短序列能測(cè)嗎?DNA納米材料能測(cè)嗎?

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    超微量分管光度計(jì)并不直接測(cè)量濃度,而是通過光學(xué)檢測(cè)器測(cè)量樣品的吸光值,根據(jù)朗伯-比爾定律計(jì)算濃度的。因此,符合該定律的所有樣品均可以被測(cè)量。以NP80機(jī)型為例,檢測(cè)器的檢測(cè)范圍為0.02A-330A(已換算為10mm下吸光值),波長(zhǎng)范圍為200-900nm,那么原則上樣品的吸光值和吸收波長(zhǎng)只要落在這個(gè)范圍內(nèi),都可以被測(cè)量,可獲得定量或相對(duì)定量的濃度值和其他信息。

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    核酸中的嘌呤和嘧啶堿基有共軛雙鍵,具有吸收紫外光的性質(zhì),其至大吸收波長(zhǎng)在250nm-270nm之間。堿基與戊糖、磷酸形成核苷酸后,其至大吸收峰不會(huì)改變,至大吸收波長(zhǎng)約在260nm,吸收低峰在230nm。目前通行的標(biāo)準(zhǔn),在波長(zhǎng)260nm處,1單位OD值的光密度相當(dāng)于雙鏈DNA(dsDNA)濃度為50ng/μl、單鏈DNA(ssDNA)濃度為37ng/μl、RNA濃度為40ng/μl、單鏈寡核苷酸為33ng/μl(常規(guī)值)。

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    也就是說,設(shè)備測(cè)量的吸光值,乘以這些系數(shù)(1/ε),就可以得到對(duì)應(yīng)樣品的濃度值。任何種類的核酸樣品都是可以測(cè)量的,關(guān)鍵是在軟件中正確選擇樣品種類。Nanophotometer?測(cè)量界面可選擇多種核酸樣品類型,在報(bào)告中也會(huì)有對(duì)應(yīng)的方法學(xué)及消光系數(shù)顯示。也可以輸入核苷酸的序列來確定樣品具體的消光系數(shù)(可支持70萬個(gè)以上堿基序列,但通常用于寡核苷酸具體消光系數(shù)的確認(rèn))。


    如果錯(cuò)誤地選擇了樣品類型,但已完成了測(cè)量,也有兩種方法可以補(bǔ)救:

    方法一:不抬起樣品蓋,重新選擇正確的樣品類型,再次測(cè)量。Implen的樣品壓縮法支持這種操作,而液柱拉伸法不建議一滴樣品的多次測(cè)量。

    方法二:在結(jié)果中查看吸光值數(shù)據(jù),手動(dòng)乘以消光系數(shù),計(jì)算濃度。

    例如:測(cè)量RNA樣品時(shí),選擇了dsDNA樣品,測(cè)得濃度為200ng/μl,則樣品實(shí)際濃度應(yīng)為160ng/μl(200/50×40ng/μl)(暫不考慮很小的背景校正)。


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    對(duì)于蛋白質(zhì)應(yīng)用,原理相同,根據(jù)0.02-330A的吸光值檢測(cè)范圍,結(jié)合蛋白質(zhì)的消光系數(shù)ε,可確定任意蛋白質(zhì)樣品的濃度檢測(cè)范圍。如BSA(消光系數(shù)0.667)檢測(cè)范圍為0.03-478mg/ml,則某消光系數(shù)為1.33的單抗樣品檢測(cè)范圍即為0.015-239mg/ml。實(shí)際的線性范圍需要根據(jù)樣品情況具體測(cè)試。 

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    Nanophotmeter?基于紫外-可見吸收光譜的測(cè)量,不但可以勝任各種核酸和蛋白質(zhì)的定量,還具備全光譜測(cè)量的優(yōu)異性能,Implen在分析化學(xué)領(lǐng)域也具有廣泛的應(yīng)用。樣品壓縮法的一大特點(diǎn)就是良好的樣品兼容性,推出的4096陣列CMOS檢測(cè)器也使測(cè)量的可靠性進(jìn)一步提高。對(duì)于多樣化的樣本測(cè)量,Implen可以充分滿足用戶的期望。


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